色譜柱的清洗和再生的幾個(gè)方法

通常情況下，

對(duì)于常用的反相色譜柱出現(xiàn)了嚴(yán)重的柱效降低需要考慮再生時(shí)，建議大家用以下流程來進(jìn)行沖洗：

一、沖洗流程

1. 20倍柱體積水：乙腈= 95%：5% （用于移除系統(tǒng)中緩沖鹽，可根據(jù)常用緩沖鹽濃度調(diào)整比例）
2. 20倍柱體積 乙腈
3. 5倍柱體積 異丙醇
4. 20倍柱體積 正己烷
5. 20倍柱體積 乙腈。20倍柱體積 水：乙腈=95%：5% （可與步驟1保持相同的比例）
6. 用所需的流動(dòng)相比例重新平衡色譜柱

實(shí)際上在色譜柱沖洗時(shí)，

很多實(shí)驗(yàn)室習(xí)慣用沖洗時(shí)間來評(píng)價(jià)是不是達(dá)到我們想要的效果。

例如某位師傅告訴你把這個(gè)柱子沖半個(gè)小時(shí)就可以了。 

然而色譜柱的沖洗應(yīng)該使用沖洗的溶劑體積來評(píng)價(jià)沖洗效果。

例如這次提到的20倍柱體積的乙腈沖洗色譜柱是指什么呢？

其實(shí)柱體積需要按照你使用的色譜柱的內(nèi)徑和柱長(zhǎng)來計(jì)算。

 

通過公式就很容易算出柱體積了，

例如一根4.6mm內(nèi)徑，150 mm柱長(zhǎng)的色譜柱柱體積為：

如果要用20倍柱體積的乙腈沖洗色譜柱就需要約34mL的乙腈，假設(shè)你的柱流量是1mL/min，那就要用乙腈沖洗34分鐘。

當(dāng)柱流量是1.5 mL/min時(shí)就需要用乙腈沖洗約23分鐘。

沖洗色譜柱時(shí)，色譜柱的尾端不要接檢測(cè)器，接一個(gè)可以收納廢液的容器就行了。

為了應(yīng)對(duì)不同類型的分析項(xiàng)目，實(shí)驗(yàn)室里常常會(huì)配置三種柱子：

一根弱極性柱，一根中等極性柱，和一根強(qiáng)極性柱。